實(shí)驗(yàn)員通過核酸擴(kuò)增儀開展擴(kuò)增反應(yīng)。（資料圖片）
P3實(shí)驗(yàn)室是廣東省第二人民醫(yī)院“手撕病毒”的秘密武器之一，每天，有400多份新冠肺炎核酸檢測(cè)均在這里開展。病毒究竟在P3實(shí)驗(yàn)室是怎樣被“揪出來”的？下面就讓經(jīng)濟(jì)日?qǐng)?bào)記者帶您一同揭開該院P3實(shí)驗(yàn)室的神秘面紗。
“這里是與病毒‘零距離’接觸的地方，整個(gè)實(shí)驗(yàn)室完全密封，室內(nèi)處于負(fù)壓狀態(tài)，我們喜歡用‘三流’來形容它，即人流、物流、氣流的單向流動(dòng)，確保在里面的污染物不會(huì)泄漏到外面而造成污染。”廣東省第二人民醫(yī)院P3實(shí)驗(yàn)室主任林劍國(guó)說。
“這里”，指的就是P3實(shí)驗(yàn)室。每天，廣東省第二人民醫(yī)院400多份新冠肺炎核酸檢測(cè)在這里開展。作為全國(guó)首家省級(jí)應(yīng)急醫(yī)院，廣東省第二人民醫(yī)院擁有WHO國(guó)際應(yīng)急醫(yī)療隊(duì)，有著與病毒戰(zhàn)斗的豐富經(jīng)驗(yàn)。而P3實(shí)驗(yàn)室，就是該院“手撕病毒”的秘密武器之一。
前世今生
P3實(shí)驗(yàn)室是生物安全防護(hù)三級(jí)實(shí)驗(yàn)室的簡(jiǎn)稱，P是Protection的縮寫。整個(gè)實(shí)驗(yàn)室完全密封，室內(nèi)處于負(fù)壓狀態(tài)，從而使其內(nèi)部氣體不會(huì)泄漏到外面而造成污染，也就是“氣流”的單向流動(dòng)。
根據(jù)微生物及其毒素的危害程度不同，生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室分為4級(jí)：一級(jí)最低，四級(jí)最高。一級(jí)實(shí)驗(yàn)室適用于對(duì)健康成年人無致病作用的微生物；二級(jí)適用于對(duì)人和環(huán)境有中等潛在危害的微生物；三級(jí)適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重甚至是致死疾病的致病微生物或其毒素；四級(jí)適用于對(duì)人體具有高度危險(xiǎn)性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明、尚無有效疫苗或治療方法的致病微生物或其毒素。
廣東省第二人民醫(yī)院新冠病毒核酸檢測(cè)就是在P3實(shí)驗(yàn)室開展的。這一P3實(shí)驗(yàn)室的口號(hào)是3P，平戰(zhàn)結(jié)合（Peacetime war），警鐘長(zhǎng)鳴（Precaution），與時(shí)俱進(jìn)（Progression）。平戰(zhàn)結(jié)合：平時(shí)以科研為主，定期進(jìn)行應(yīng)急演練，一旦有疫情發(fā)生，立即進(jìn)入應(yīng)急工作狀態(tài)。警鐘長(zhǎng)鳴：時(shí)刻保持清醒頭腦，密切注意全球及國(guó)內(nèi)感染性疾病研究動(dòng)向，做到防患于未然。與時(shí)俱進(jìn)：及時(shí)跟進(jìn)國(guó)際新知識(shí)、新技術(shù)、新設(shè)備，以國(guó)際視野打造實(shí)驗(yàn)室。
抽絲剝繭
核酸檢測(cè)是確診新冠肺炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”，而檢測(cè)流程中的每一個(gè)環(huán)節(jié)都是精細(xì)活，容不得半點(diǎn)馬虎。在操作中，實(shí)驗(yàn)員面對(duì)眼前的樣本，需要“一個(gè)一個(gè)揭開蓋子加樣和核酸提取”，這無疑是與病毒的正面交鋒。
那么，P3實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)員是如何與病毒“過招”的？據(jù)介紹，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的檢測(cè)流程可分為5個(gè)步驟：樣本進(jìn)入“傳遞窗”——滅活處理——開蓋加樣和核心提取——擴(kuò)增反應(yīng)判斷結(jié)果——高壓滅菌。
第一步是樣本進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。采集的檢測(cè)樣本在進(jìn)入P3實(shí)驗(yàn)室前，得先進(jìn)入一個(gè)特殊的窗口——“傳遞窗”，也叫作空氣鎖。它有不能同時(shí)打開的雙重門，保證傳遞樣本時(shí)帶進(jìn)去的空氣被隔離在雙重門中，使實(shí)驗(yàn)室外的環(huán)境不受污染。樣本將在這里開啟它在實(shí)驗(yàn)室中短暫的一生。
第二步是檢測(cè)前的滅活處理。樣本將在水浴箱經(jīng)半小時(shí)56℃高溫滅活，使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力。這會(huì)讓檢測(cè)時(shí)相對(duì)安全，但病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。
第三步是檢測(cè)的核心環(huán)節(jié)——開蓋加樣和核酸提取。
該院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部副主任技師胡亮杉是進(jìn)入P3負(fù)壓實(shí)驗(yàn)室完成設(shè)備調(diào)試、程序設(shè)定、試劑試用等前期準(zhǔn)備工作的第一人。“在標(biāo)本處理間，實(shí)驗(yàn)員拿到滅活后的樣本時(shí)，第一個(gè)動(dòng)作就是振蕩，盡量讓拭子上的病毒洗脫在培養(yǎng)基溶液中，再靜置5分鐘沉淀。接下來是開蓋加樣，必須人工操作，且需要兩個(gè)人高度配合才能完成。一人擰開樣本罐蓋子，另一人拿著微量移液器在樣本罐中吸取微量溶液，放到另一個(gè)提取管里，再擰上管蓋。”她介紹，就這樣，400多份樣本要打開瓶蓋吸取轉(zhuǎn)移400多次，每一次都是實(shí)驗(yàn)員與病毒面對(duì)面的“開撕”。
“在開蓋轉(zhuǎn)移過程中，病毒非常容易暴露在實(shí)驗(yàn)室空氣中。”胡亮杉說，“開蓋加樣時(shí)，拿著微量移液器的手往往因?yàn)榇髦p重手套，顯得有些笨拙，可又不得不小心翼翼，再加上眼罩、面屏和生物安全柜玻璃窗的三重阻隔，所有動(dòng)作都顯得緩慢，手也因?yàn)閯?dòng)作的緩慢不時(shí)顫抖，經(jīng)常是左手扶著右手完成加樣的。”
人工核酸提取的步驟更為復(fù)雜，考驗(yàn)著實(shí)驗(yàn)員的耐心與謹(jǐn)慎。“核酸提取可以使用儀器輔助，但由于比對(duì)需要，往往要加以人工操作，需要反復(fù)進(jìn)行離心、加試劑、洗滌等10多個(gè)步驟。其中，需要打開管蓋的操作就達(dá)7次以上，完成一例人工核酸提取要50分鐘左右。”胡亮杉說。
第四步是判斷結(jié)果。提取的核酸送到核酸檢測(cè)室內(nèi)，就要上儀器了。實(shí)驗(yàn)員將提取的核酸加入到擴(kuò)增試劑中，通過熒光PCR儀進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，用時(shí)約110分鐘，就可分析判斷結(jié)果為陰性或陽(yáng)性了。
最后是污染物的高壓滅菌處理。實(shí)驗(yàn)過程產(chǎn)生的污染物通過高壓滅菌后，按普通醫(yī)療垃圾處理。
安全保障
再來看看工作人員是如何工作的。
首先，在清潔區(qū)內(nèi)穿戴中級(jí)防護(hù)服——通過緩沖間進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室內(nèi)負(fù)壓工作間，在這里處理標(biāo)本，核酸提取及檢測(cè)——完畢后進(jìn)行空間、表面消毒，按順序脫下防護(hù)服，通過淋浴間更衣后，回到清潔區(qū)。這些步驟一個(gè)都不能少。
核酸檢測(cè)的宗旨是高效、有序和安全。其中，工作人員的安全是重中之重。為確保安全，該院采取了多種措施。第一，人員篩選，在下達(dá)抗疫動(dòng)員令后，許多人踴躍報(bào)名，經(jīng)過重重篩選，留下來的都是身體健康、訓(xùn)練有素的年輕“老手”；第二，崗前安全培訓(xùn)，嚴(yán)格按要求穿戴防護(hù)服，熟悉操作流程；第三，嚴(yán)格執(zhí)行消毒滅菌制度，該院P3實(shí)驗(yàn)室管理員閆修魁全程負(fù)責(zé)每天的消毒工作；第四，建立感控督導(dǎo)員制度，及時(shí)發(fā)現(xiàn)負(fù)壓區(qū)工作人員的不適或操作不當(dāng)之處，確保人員身心安全。
到目前為止，該院P3實(shí)驗(yàn)室未出現(xiàn)過生物安全問題。
去偽存真
在P3實(shí)驗(yàn)室，任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題均可能導(dǎo)致“假陰性”或“假陽(yáng)性”。為保障檢測(cè)質(zhì)量，檢測(cè)結(jié)果將經(jīng)歷重重比對(duì)與復(fù)核。
據(jù)介紹，檢測(cè)質(zhì)量的保障措施在檢測(cè)前就已經(jīng)開始了。樣本采集的醫(yī)務(wù)人員必須經(jīng)過嚴(yán)格培訓(xùn)和考核才能上崗，樣本質(zhì)量與采集技術(shù)密切相關(guān)，每一幀動(dòng)作流程都必須按規(guī)定進(jìn)行。樣本采集完后的護(hù)送工作均需按照嚴(yán)密程序，由專人專道配送到實(shí)驗(yàn)室。
在檢測(cè)過程中，實(shí)驗(yàn)員謹(jǐn)慎對(duì)待每一次測(cè)試，不錯(cuò)過任何一個(gè)可疑樣本。針對(duì)可疑樣本，將選用不同試劑復(fù)核確定，防止“假陰性”出現(xiàn)；同時(shí)，每進(jìn)行一批實(shí)驗(yàn)，均會(huì)隨機(jī)插入3個(gè)以上空白對(duì)照，針對(duì)陽(yáng)性樣本會(huì)開展病毒基因的測(cè)序比對(duì)，以防止“假陽(yáng)性”出現(xiàn)。
檢測(cè)后，實(shí)驗(yàn)室將定期隨機(jī)抽取檢測(cè)后的樣本送第三方實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，對(duì)數(shù)據(jù)對(duì)比分析，保障檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
所向披靡
被稱為“偵察兵”的該院P3檢測(cè)團(tuán)隊(duì)目前有21人，70%以上是碩士以上學(xué)歷，均經(jīng)過分子生物學(xué)培訓(xùn)，擁有PCR上崗證。
“與戰(zhàn)斗在病房里的醫(yī)護(hù)人員不同，他們藏在實(shí)驗(yàn)室里，每天與病毒近距離接觸，是別人看不見的‘最前線’。”林劍國(guó)說。
據(jù)悉，該實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格遵照“新型冠狀病毒肺炎診療方案”及生物安全要求，檢測(cè)人員需在P3實(shí)驗(yàn)室負(fù)壓密閉空間內(nèi)穿著中級(jí)防護(hù)裝備，5個(gè)小時(shí)不吃不喝，并要克服因負(fù)壓差及嚴(yán)密裝備導(dǎo)致的頭暈、嘔吐等癥狀。
不僅如此，檢測(cè)人員還要克服心理上的恐懼。咽拭子樣本是從疑似患者鼻咽部采集的，可能含有較多新冠病毒。檢測(cè)人員從采樣罐里拿出樣本時(shí)，病毒在密閉環(huán)境中很容易借助空氣傳播，但他們依然無怨無悔地戰(zhàn)斗在前線，把好第一道關(guān)。（記者 鄭 楊)
